PCR无法P出目的条带最近在做PCR,提取的基因组为模板,基因组序列上从NCBI上找的,没有错.但是无论如何换引物和PCR条件,都会得到一条比目的片段大500bp左右的亮条带.(引物换了很多对儿,卡的

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/30 07:53:21

PCR无法P出目的条带最近在做PCR,提取的基因组为模板,基因组序列上从NCBI上找的,没有错.但是无论如何换引物和PCR条件,都会得到一条比目的片段大500bp左右的亮条带.(引物换了很多对儿,卡的
PCR无法P出目的条带
最近在做PCR,提取的基因组为模板,基因组序列上从NCBI上找的,没有错.但是无论如何换引物和PCR条件,都会得到一条比目的片段大500bp左右的亮条带.(引物换了很多对儿,卡的应该没有问题)这会不会是因为用于提取基因组的菌种曾经被噬菌体感染,然后刚好在目的片段被插入了一段500bp的小片段呢?求助!

PCR无法P出目的条带最近在做PCR,提取的基因组为模板,基因组序列上从NCBI上找的,没有错.但是无论如何换引物和PCR条件,都会得到一条比目的片段大500bp左右的亮条带.(引物换了很多对儿,卡的
菌落PCR的假阳性高很可能是因为你做PCR的循环数过大,我们实验室一般对于高拷贝数的质粒,循环数不会超过25个,一般用25个.假阳性出现的原因关键在于做连接的时候加了比较多的目的基因的酶切产物,在转化时,那些没有连接入载体的PCR产物,有的会沾在感受态细胞上,还有的虽然在溶液中,涂板时一起就一起涂在板上了,挑菌的时候可能会挑到,即使没挑到,但菌表面的基因片段也有可能被扩增,如果你的循环数太高,就会在PCR时呈现阳性结果.

看一下延伸时间是不是改变了。这种情况可能是引物的问题应该是引物没有设计好,易形成二聚体或者发卡结构引起的。

PCR无法P出目的条带最近在做PCR,提取的基因组为模板,基因组序列上从NCBI上找的,没有错.但是无论如何换引物和PCR条件,都会得到一条比目的片段大500bp左右的亮条带.(引物换了很多对儿,卡的 在做PCR实验时为什么总是P不出条带? 革兰氏阳性菌PCR革兰氏阳性菌如何做菌落PCR?煮20 min后,还是不能P出目的条带. 我做转基因植物,最近一直做PCR鉴定,但只有引物二聚体,原因会有哪些?转同样的基因,在转基因烟草的PCR鉴定时,能P出目的条带,而且我用的是相同的条件来做我的却得不到结果.会不会和物种有 [菌液PCR,测序,DNA提取,求助]菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确? 菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确? 关于转基因植株检测的问题我做的是大豆转基因,最近做检测,用328bp的引物做PCR时质粒很正常,可是基因组在328bp左右没有出现条带,而在700bp出现很亮的条带;用35S引物PCR,在目的条带那 您好!我需要从cDNA调取一段基因,引物已经设计好,在PCR过程中不知如何调整体系,P不出目的条带?您好!我需要从cDNA调取一段基因,引物已经设计好,在PCR过程中不知如何调整体系,P不出目的条带? 为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢我用蓝白斑做的 T载体和目的片段连,为什么篮斑的 做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢? 最近在做实验RT-PCR,我做RT-PCR,一对引物Tm值分别是52.2,54.6.目的片段1062,PCR反应条件怎么设置呀 在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么? 转基因得到了转化苗,做PCR的时候,如果质粒P出了阳性 对照的基因组没有条带 是不是就能确定没转进去基因第一次做的时候,质粒是阳性的,样品有2个在目的片段那也出现了条带,但很暗,后来再 在做载体构建的时候,PCR时有目的条带,但是摇菌酶切没有东西,请问是怎么回事啊? PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带 PCR跑出的条带与目的条带不同怎么办 对于一段有重复序列的片段如何扩增,只是一个基因的中间的部分序列,准备扩增做overlap.我在两端设计的无配对引物,无法扩增目的条带,不知对PCR 条件有什么要求? PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么? pcr杂带在目的条带之上.以前有做过同样的程序,同样的引物和酶.p细菌时,若1492r/27f,则在大于1500bp处有杂带,但比目的条带弱.用357fgc和518r时,则在400bp左右有杂带,而200bp的目的条带也不亮.消除杂