T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到

T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来回收的片段1K左右 是否目的基因在PCR扩增时不用在引物中加入酶切位点,就可与pGEM-T载体连接?为什么? 为什么构建克隆载体不需T4连接酶为什么PCR扩增出的DNA片段和克隆载体pMD 18-T连接不需T4连接酶,而和表达载体连接就需要T4连接酶. 关于CDNA文库的问题求解释以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞 能不能用PCR直接扩增目的片段,然后转入表达载体,代替在克隆载体或dh5a中的扩增 有现成的质粒,无原始的菌种或菌液,如何对质粒进行扩增?目的基因先后连接到T载体和表达载体之后,接种到培养液中,培养液在摇床上培养12-16h后提取的质粒.现在质粒快用完了,但是目的基因 平末端连接问题最近在做载体构建,有一个5k左右的片段要连接到一个12k左右的载体骨架上,两端都是平末端,始终连不上,不知道连接体系需要怎样的优化,连接酶要多,但是一个10ul的体系中,到底 如何克服载体自身连接的问题? 转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带（即之前的连接产物,约3k 在PCR产物基础上如何设计RACE引物,其原理是怎样的?我未做过RACE.看了你对“未知基因扩增”的回答,觉得你是个专家.也许我没说清楚。按某同源基因的保守序列扩增好了基因的内部连段，然后 双酶切鉴定（或者测序）是否含有目的基因的时候,为何用pMD18-T载体?过程主要是：从小麦胚胚芽鞘中提出总的RNA,反转录cDNA,然后纯化cDNA,特异性PCR扩增,电泳,得到目的基因,然后连接载体pMD18-T 连接前加错了酶切的载体怎么办?我是个新手,做实验的时候在连接转化前,加入载体加错了,应该加NdeI-HindIII酶切的PET-28a,我加成了NdeI-XholI酶切的PET-28a~现在涂板已经长出来了但是不对吧~怎么办 各位高手请问一下Burkholderia菌是属于细菌,我可以用3'RACE方法扩增其全基因序列吗?引物怎么设计谢谢你的回答,不过我现在做的是Burkholderia产的脂肪酶的全基因扩增,通过酶的分离纯化后得到N 找双酶切位点有哪些原则?我的目的片段连载PMD18-T载体上,现在想做双酶切,再和绿色荧光蛋白的载体连接起来做表达,已经确认一个酶EcorI,另一个酶不知道该选哪一个?不知道这其中有什么要注 博凌科为的pSURE -T Simple 载体连接试剂盒如何? t载体连接产物4度可以保存3天吗 pGEMX -T Easy 载体连接试剂盒 哪家的好?