作业帮哪些因素影响转录体系的转化率用大肠杆菌做转化表达的时候
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/08 09:45:40
哪些因素影响转录体系的转化率用大肠杆菌做转化表达的时候
哪些因素影响转录体系的转化率
用大肠杆菌做转化表达的时候
哪些因素影响转录体系的转化率用大肠杆菌做转化表达的时候
答案一：
1．致敏缓冲液中试剂的纯度与浓度对转化率影响很大,试剂必须为分析纯,同时,致敏缓冲液最好避光贮存于40℃.
2．制备感受态细胞的全部操作均须于冰浴低温操作,同时注意无菌操作,防止感受态细胞受杂菌污染.
3．42℃热处理时间很关键,转移速度要快,且温度要准确,同时注意热处理过程中离心管不要摇动.
4．菌液涂皿操作时,应避免反复来回涂布,因为感受态细菌的细胞壁有了变化,过多的机械挤压涂布会使细胞破裂,影响转化率.
5．实验用的玻璃器皿、微量吸管及Eppendorf管等,应彻底洗净并进行高压消毒,表面去污剂及其他化学试剂的污染往往大幅度地降低转化率.
答案二
影响转化率的关键因素：
①生长时期：实验发现在对数中期的大肠杆菌易生成感受态.转化时菌浓度应控制在不超过107／ml.
②CaCl2法0℃放置时间的影响：细菌经0℃ CaCl2处理后转化率随时间的推移而增加,24h达到最高,之后转化率逐渐下降.
③化合物及无机离子的影响：在Ca2+的基础上,联合其他二价金属离子(如Mn2+,CO2+)、DMSO或还原剂等物质处理细菌,可使转化率提高100～1000倍.
④质粒大小、构型的影响：通过构建相同复制起点的不同大小质粒进行转化时发现,从2kb到3．2kb的转化效率上升,此后到66kb转化效率线性下降.同时,开环状质粒只有超螺旋质粒转化率的75％,线型质粒的转化率更要低100～1000倍,线型转化率低是因菌体中核酸外切酶将进入的线型DNA降解的原因.
⑤菌株基因型recA+与recA-的影响：recA基因是rec系列中最主要的基因,编码同源重组蛋白.考虑到质粒DNA在recA+菌中存在与细菌染色体DNA整合的可能,因而,通常在转化实验中都选用recA-菌株作为宿主菌.