为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来考染是一条蓝带呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?我把菌液沉淀用100微升DDH2O悬的,然后超声,我跑的是超声后的菌液和超声后菌液离心的上清。加入

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/07 08:47:27

为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来考染是一条蓝带呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?我把菌液沉淀用100微升DDH2O悬的,然后超声,我跑的是超声后的菌液和超声后菌液离心的上清。加入
为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来考染是一条蓝带呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?
我把菌液沉淀用100微升DDH2O悬的,然后超声,我跑的是超声后的菌液和超声后菌液离心的上清。加入等体积的2×SDS上样缓冲液。点15微升。

为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来考染是一条蓝带呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?我把菌液沉淀用100微升DDH2O悬的,然后超声,我跑的是超声后的菌液和超声后菌液离心的上清。加入
很怀疑用超声能不能裂解完全,最好还是买个细胞裂解液吧

SDS-PAGE 跑蛋白质
跑完胶后,转膜,结合一抗、二抗,加荧光底物
进暗室,用胶片显影,才能看到蛋白质条带
在正常光源下,胶和膜上只有marker和溴酚蓝
SDS-PAGE 跑DNA
需要泡到EB里面
然后上紫外光源才能看到DNA条带
在正常光源下,胶上只有marker和溴酚蓝
超声的破胞效果通常不太好,估计可能是细胞没破,或者...

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SDS-PAGE 跑蛋白质
跑完胶后,转膜,结合一抗、二抗,加荧光底物
进暗室,用胶片显影,才能看到蛋白质条带
在正常光源下,胶和膜上只有marker和溴酚蓝
SDS-PAGE 跑DNA
需要泡到EB里面
然后上紫外光源才能看到DNA条带
在正常光源下,胶上只有marker和溴酚蓝
超声的破胞效果通常不太好,估计可能是细胞没破,或者破的太少
你参考下
蛋白质样品的制备
细胞全蛋白质提取(裂解液+超声波)
将处理一细胞培养瓶中的培养基倒入15ml离心管中,用PBS洗涤培养瓶2次后,将PBS与培养基合并,1500rpm离心8min,弃上清,加1ml PBS混匀,转移至1.5ml EP管中,1800rpm离心5min,弃上清,加入20μl裂解液混匀。加入适量(大培养瓶180μl/瓶,中培养瓶90μl/瓶)细胞裂解液至细胞培养瓶中,置于冰上裂解细胞5min,用细胞刮刮下细胞收集于1.5ml EP管中,与培养液中细胞合并,稍离心,冰上裂解,然后95℃水浴 5min,超声破碎5秒,12000rpm离心20min。取上清,即为全蛋白,保存于-20℃。
做完上面这些,提纯后的蛋白质,才能加到点样孔里面
提纯DNA的方法你自己找找吧...

收起

sds-page电泳为什么用浓缩胶 sds page的用途 tricine-sds-page遇见的问题我提了一种蛋白,大概在10kD左右,我用tricine-sds-page电泳,分离胶16.5%T,夹层胶10%T,浓缩胶4%T.可是跑出的不能称为带,两头翘.分离胶:夹层胶:浓缩胶=4:1:1不知是怎麽回事 SDS-PAGE垂直板电泳中跑出的条带为何不是直线? SDS电泳为什么被叫做SDS-PAGE? 为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来考染是一条蓝带呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?我把菌液沉淀用100微升DDH2O悬的,然后超声,我跑的是超声后的菌液和超声后菌液离心的上清。加入 SDS-PAGE电泳条带我跑出来的胶分离胶上部染色脱色后没有任何条带,大概在分离胶和浓缩胶分界线下部1.5-2CM处才出现条带的痕迹,是什么原因啊, 为什么我的SDS-PAGE胶 跑出来染色是一片蓝呢?没有特别明显的条带呢?marker有清楚的带啊?我上的是超声波处理的菌液,和超声波处理的菌液离心后的上清液.真的是跪求了 SDS PAGE 电泳为什么会跑歪? sds-page电泳时marker少跑出一条带是怎么回事? sds page电泳跑胶为什么会歪掉?麻烦精通的人讲解一下. 为什么跑小蛋白时要用tricine胶?它和普通的SDS-PAGE有什么区别? PAGE与SDS-PAGE的区别 sds-page和Native-PAGE的差别 SDS-PAGE电泳为什么下层胶凝而上层胶不凝呢, SDS-PAGE的优点是什么 已知两个蛋白有相互作用,用其中一个蛋白的抗体做免疫共沉淀,SDS-PAGE胶电泳后出现几条带?出现两条带 为什么免疫共沉淀结果跑出的带比直接跑western的带要粗?是不是因为跑出的带粗 才说明 sds-page电泳的分离胶凹凸不平怎么回事